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在生物技術發展的今天，蛋白(bái)表達在科學研究以及臨床治療中起着非常重要的作(zuò)用(yòng)。而在基因技術發展的今天，蛋白(bái)的需求日益增加，大(dà)腸杆菌表達系統因爲其遺傳背景清晰、成本低(dī)以及生長迅速的優勢，使得其成爲重組蛋白(bái)表達的首選。
什(shén)麽是高(gāo)通量蛋白(bái)表達技術?
高(gāo)通量蛋白(bái)表達技術其實就是一種能(néng)夠實現(xiàn)大(dà)規模、高(gāo)效的制備蛋白(bái)的技術，可以通過不同的方法來(lái)實現(xiàn)目标蛋白(bái)的表達。
高(gāo)通量蛋白(bái)表達的步驟有哪些(xiē)?
1、目的基因制備
作(zuò)爲蛋白(bái)表達，基因制備是第一步。目的基因的提取方法有很(hěn)多，傳統的方法主要是通過從(cóng)cDNA文(wén)庫中提取。但(dàn)是，這(zhè)種方法存在一定的局限性，費時(shí)費力，而且難以添加融合标簽。現(xiàn)階段常用(yòng)的方法主要采用(yòng)PCR技術，設計(jì)好(hǎo)引物後，即可在PCR儀中完成目的基因的提取;
2、高(gāo)通量表達系統構建
和(hé)傳統的蛋白(bái)表達系統構建相似，高(gāo)通量蛋白(bái)表達系統的構建沒有特别大(dà)的改動，隻是說在一些(xiē)細節方面有着一定的不同。比如在目的基因轉錄和(hé)表達之前需要添加融合标簽，以便于提升其表達效率;
3、菌株培養
在表達系統構建成功後(一般來(lái)說，我們會(huì)選擇大(dà)腸杆菌菌株來(lái)進行表達)，而後選擇出合适的菌株。當然了(le)，對(duì)于大(dà)腸杆菌的培養來(lái)說，我們盡量選擇分批培養，這(zhè)樣才更加有利于菌株的控制;
4、高(gāo)通量蛋白(bái)表達及純化
采用(yòng)高(gāo)通量的平台，能(néng)夠實現(xiàn)迅速地進行基因克隆、挑選菌落、質粒分離、蛋白(bái)表達以及蛋白(bái)純化等操作(zuò)。當然了(le)，雖然說這(zhè)個平台的構建相對(duì)困難，但(dàn)是，對(duì)于那些(xiē)複雜(zá)的分子實驗來(lái)說，往往能(néng)提供極大(dà)的便利;
采用(yòng)大(dà)腸杆菌表達系統來(lái)實現(xiàn)高(gāo)通量重組蛋白(bái)的表達，能(néng)夠在極大(dà)程度上(shàng)推進蛋白(bái)的表達進程。雖然說在其技術水(shuǐ)平上(shàng)有着一定的要求，但(dàn)是随着技術的不斷優化和(hé)創新，能(néng)夠讓其更加高(gāo)效且可靠的進行蛋白(bái)表達。
