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在重組蛋白(bái)表達完成之後，最主要的一個步驟就是蛋白(bái)純化，隻有通過純化後的蛋白(bái)才能(néng)投入下(xià)一輪的使用(yòng)中，否則，很(hěn)容易對(duì)後期的使用(yòng)産生影響。蛋白(bái)純化需要從(cóng)複雜(zá)的混合物之中将目的蛋白(bái)提取出來(lái)，而且需要保持抗體的結構和(hé)功能(néng)。因此，了(le)解蛋白(bái)純化的原理(lǐ)和(hé)過程就顯得尤爲重要了(le)。在本文(wén)中，普健生物将和(hé)大(dà)家詳細地介紹一下(xià)重組蛋白(bái)制備時(shí)蛋白(bái)純化的具體過程。
蛋白(bái)純化的原理(lǐ)：
蛋白(bái)純化在生物工(gōng)程中是一項非常常用(yòng)的技術，能(néng)夠有效提升目的蛋白(bái)的純度，對(duì)後期的使用(yòng)和(hé)檢測都有着非常好(hǎo)的促進作(zuò)用(yòng)。蛋白(bái)純化需要結合樣本以及雜(zá)質的特性來(lái)選擇合适的方法，既要保證過程的簡單，又要不對(duì)蛋白(bái)的特性造成影響。
當然了(le)，對(duì)于純度要求較高(gāo)的實驗來(lái)說，需要在常用(yòng)純化方法中添加一個例子交換或疏水(shuǐ)作(zuò)用(yòng)色譜的中間步驟。
需要注意的是，在蛋白(bái)純化的過程中，盡量選擇哪些(xiē)步驟少的純化方式，因爲每多一個步驟都會(huì)在一定程度上(shàng)降低(dī)蛋白(bái)的産出量。
蛋白(bái)純化的步驟：
1、樣品準備。在準備好(hǎo)所有設備及耗材後，對(duì)目的蛋白(bái)進行預處理(lǐ)，去除雜(zá)質、組織、脂肪等，保證樣品的生物活性;
2、準備好(hǎo)純化柱。将純化柱固定好(hǎo)，并打開(kāi)封蓋;
3、樣品加載。将樣品從(cóng)純化柱底部接入引流管，并将樣品導入純化柱内部;
4、洗脫。将純化柱内充滿樣品後，對(duì)其進行洗脫。比如使用(yòng)乙醇将雜(zá)質和(hé)緩沖液沖洗掉;
6、再生及使用(yòng)。根據需要對(duì)純化柱進行再生，恢複其功能(néng)，以便于下(xià)一次使用(yòng);
7、收集及檢測。對(duì)收集所得上(shàng)清液和(hé)洗脫液，并對(duì)所得樣品進行檢測，評估出目的蛋白(bái)純度;
當然了(le)，如上(shàng)的重組蛋白(bái)蛋白(bái)純化方法爲一般蛋白(bái)純化流程，具體的蛋白(bái)純化需要根據蛋白(bái)的性質和(hé)需求來(lái)進行改變，雖然說大(dà)體過程相同，但(dàn)是一些(xiē)細節操作(zuò)方面有着一定的不同。在實際操作(zuò)中，還需要控制好(hǎo)實驗的精确性，這(zhè)樣才能(néng)在更大(dà)程度上(shàng)保證蛋白(bái)的完整度和(hé)生活活性。武漢普健生物專業爲廣大(dà)用(yòng)戶提供重組蛋白(bái)純化操作(zuò)，如果您有相關需求，歡迎來(lái)電咨詢。
