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真核蛋白(bái)表達系統是我們比較常用(yòng)的一種蛋白(bái)表達方式，它一般采用(yòng)酵母、昆蟲、哺乳動物來(lái)進行表達，所産生的蛋白(bái)和(hé)靶DNA具備高(gāo)度的相似性，能(néng)夠誘導高(gāo)效表達。但(dàn)是其在實驗過程中的可誘導性、生物利用(yòng)率、劑量依賴性等方面有着較高(gāo)的要求，所以，日常使用(yòng)中需要權衡利弊後再來(lái)選擇。那麽，在真核蛋白(bái)表達時(shí)，我們如何進行蛋白(bái)純化呢(ne)?
其實我們知(zhī)道(dào)，無論是原核表達還是真核表達都需要進行蛋白(bái)純化，這(zhè)樣才能(néng)提升蛋白(bái)的作(zuò)用(yòng)效果，使其達到(dào)我們的使用(yòng)需求。所以，蛋白(bái)純化，是蛋白(bái)表達過程中非常重要的一個環節。
天然大(dà)分子蛋白(bái)純化：
通過蛋白(bái)特性，選擇合适孔徑的分子篩進行純化，同時(shí)搭配陰離子柱或陽離子柱，可以獲得純度高(gāo)達95%的蛋白(bái);
天然小(xiǎo)分子分離純化：
通過分子篩過濾掉大(dà)部分的大(dà)分子，然後再使用(yòng)大(dà)孔樹脂或反向樹脂純化小(xiǎo)分子化合物，再通過HPLC和(hé)MS對(duì)小(xiǎo)分子肽進行篩選即可;
未知(zhī)蛋白(bái)純化：
結合客戶提供的蛋白(bái)特性，選擇相對(duì)應的方法，最後采用(yòng)質譜鑒定，看(kàn)是否滿足用(yòng)戶的需求。一般來(lái)說，對(duì)于這(zhè)種未知(zhī)的蛋白(bái)質，我們所采用(yòng)的方法也(yě)不外(wài)乎如上(shàng)兩種，或者結合使用(yòng)的方式;
真核蛋白(bái)純化前客戶需要提供哪些(xiē)支持?
1、基因序列。爲了(le)更好(hǎo)地制備蛋白(bái)，客戶需要提供準确的基因序列，并告知(zhī)蛋白(bái)标簽及相關要求，同時(shí)告知(zhī)蛋白(bái)的用(yòng)途(一般來(lái)說，制備的蛋白(bái)僅供研發使用(yòng)，不适用(yòng)于臨床使用(yòng));
2、提供質粒。客戶需提供質粒，且量不小(xiǎo)于100ng，同時(shí)提供序列文(wén)件;
3、根據實驗要求，蛋白(bái)序列、分子量、等電點等信息;
真核蛋白(bái)表達系統雖然說獲得的蛋白(bái)特性更強、效果更好(hǎo)，但(dàn)是相關投入以及技術需求就不是原核蛋白(bái)表達系統所能(néng)比拟的。當然了(le)，在蛋白(bái)制備完成後，所用(yòng)的蛋白(bái)純化方法較爲類似，可以采用(yòng)類似的方法。普健生物專業爲您提供真核蛋白(bái)表達及蛋白(bái)純化服務，如果您有相關需求，歡迎來(lái)電咨詢。
