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蛋白(bái)純化是實驗中最重要的方式之一，它不僅能(néng)提升蛋白(bái)純度，保障實驗的順利進行，而且能(néng)夠提升實驗的精度。所謂的蛋白(bái)純化其實就是依據生物學的特性(比如電荷、大(dà)小(xiǎo)、親疏水(shuǐ)等)，選擇出合适的方法，将蛋白(bái)從(cóng)混合物中分離出來(lái)。下(xià)面，普健生物和(hé)大(dà)家具體聊聊有關蛋白(bái)純化的常用(yòng)方法和(hé)步驟。
一、凝膠過濾層析法
原理(lǐ)：主要通過分子的大(dà)小(xiǎo)進行分離，利用(yòng)不同孔徑的凝膠來(lái)過濾，從(cóng)而将較大(dà)和(hé)較小(xiǎo)蛋白(bái)分離開(kāi)來(lái);
具體步驟如下(xià)：
1、将混合物加入到(dào)凝膠柱中;
2、加入緩沖液對(duì)其進行洗脫，将較大(dà)分子留下(xià)來(lái);
3、将大(dà)小(xiǎo)适中的蛋白(bái)保留下(xià)來(lái);
4、而後通過添加洗脫緩沖液從(cóng)凝膠柱中洗脫出來(lái);
二、親和(hé)層析法
原理(lǐ)：通過抗體親和(hé)力之間的不同來(lái)實現(xiàn)蛋白(bái)純化;
具體步驟如下(xià)：
1、将蛋白(bái)加入到(dào)含特異性結合配體的親和(hé)層析柱中;
2、讓抗體與配體之間進行結合;
3、通過加入洗脫液将非特異性結合的組分洗脫出來(lái)，實現(xiàn)蛋白(bái)純化;
三、離子交換層析法
原理(lǐ)：通過抗體分子與離子交換柱之間的相互作(zuò)用(yòng)來(lái)實現(xiàn)純化;
具體步驟如下(xià)：
1、将混合物放(fàng)入離子交換柱中;
2、加入緩沖液進行洗脫;
3、通過抗體表面電荷不同，能(néng)夠保留在離子交換柱中;
4、而後通過洗脫液将其從(cóng)交換柱中洗脫出來(lái);
四、逆向相色譜法
原理(lǐ)：利用(yòng)目标抗體與逆向相色譜柱中親疏水(shuǐ)基團之間的相互作(zuò)用(yòng)來(lái)實現(xiàn)純化;
具體步驟如下(xià)：
1、将混合物加入到(dào)平衡好(hǎo)的逆向相色譜柱中;
2、加入緩沖液進行洗脫，讓疏水(shuǐ)性較低(dī)的分子無法通過逆向相色譜柱中;
3、因爲親疏水(shuǐ)性不同，使得其保留在逆向相色譜柱中;
4、通過PH值、酸堿度等不同，将目标抗體從(cóng)色譜柱中洗脫出來(lái);
其實大(dà)家不難看(kàn)出，抗體純化在步驟上(shàng)其實并不存在太大(dà)的區(qū)别，隻是在吸附柱以及洗脫液上(shàng)面有着一定的區(qū)别，需要根據具體條件來(lái)具體調整。當然了(le)，也(yě)需要有一定的技術支持。普健生物專業爲廣大(dà)用(yòng)戶提供蛋白(bái)純化服務，如果您有相關需求，歡迎來(lái)電咨詢。
