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大(dà)腸杆菌表達系統作(zuò)爲最常用(yòng)來(lái)進行蛋白(bái)表達的五大(dà)系統之一，已經算(suàn)得上(shàng)是非常成熟地表達系統了(le)。相對(duì)其他(tā)系統而言，其遺傳背景清晰、操作(zuò)簡單、表達水(shuǐ)平高(gāo)、成本低(dī)、周期短等特點，使得其的使用(yòng)非常的廣泛，重組蛋白(bái)表達也(yě)常常會(huì)使用(yòng)到(dào)大(dà)腸杆菌。那麽，您知(zhī)道(dào)大(dà)腸杆菌表達重組蛋白(bái)時(shí)常常會(huì)遇到(dào)哪些(xiē)問題嗎?今天普健生物就和(hé)您具體聊聊。
1、爲什(shén)麽要用(yòng)到(dào)大(dà)腸杆菌表達系統?它的優勢有哪些(xiē)?
我們之前說到(dào)過，大(dà)腸杆菌繁殖速度快(kuài)，大(dà)概20分鐘(zhōng)就能(néng)實現(xiàn)倍增，而且轉染率高(gāo);容易實現(xiàn)高(gāo)密度培養，可以通過溫度來(lái)實現(xiàn)直接控制;
2、哪些(xiē)方法可以去除蛋白(bái)标簽?
去除重組蛋白(bái)标簽的方法主要有兩種：酶消化法和(hé)化學裂解法。酶消化法其實就是利用(yòng)腸激酶、凝血酶、煙(yān)草蝕刻病毒蛋白(bái)酶等去溢出蛋白(bái)标簽的方式，是現(xiàn)階段最常用(yòng)的标簽去除方法。化學裂解法他(tā)剛才用(yòng)于融合伴侶蛋白(bái)的移除，使用(yòng)範圍相對(duì)來(lái)說要窄一些(xiē)，但(dàn)是勝在價格便宜;
3、所謂的最合适的表達宿主有哪些(xiē)?
其實所的最合适的表達宿主需要結合實際情況以及蛋白(bái)需求來(lái)進行選擇，成本投入不同、技術實力不同等選擇的宿主也(yě)是各不相同。重組蛋白(bái)原核表達最常采用(yòng)BL21和(hé)K-12來(lái)作(zuò)爲表達宿主;
4、爲什(shén)麽會(huì)出現(xiàn)低(dī)表達甚至無表達?
誘導前後蛋白(bái)純在毒素或者表達過程中密碼子有偏向性都會(huì)造成蛋白(bái)表達過低(dī)或是無表達的情況。我們可以通過控制本底表達水(shuǐ)平、控制誘導表達水(shuǐ)平、優化質粒DNA等方式來(lái)進行調控;
5、蛋白(bái)包涵體形成的原因有哪些(xiē)?
蛋白(bái)形成的過程中如果形成了(le)不正确的二硫鍵、出現(xiàn)錯誤折疊、缺少翻譯後修飾等過程都可能(néng)會(huì)造成蛋白(bái)包涵體形成。我們可以通過表達分子伴侶、移除誘導劑、低(dī)溫誘導表達、改變融合伴侶蛋白(bái)、該表表達宿主等一系列的方式來(lái)解決這(zhè)個問題;
總的來(lái)說，這(zhè)些(xiē)都是我們在操作(zuò)中會(huì)出現(xiàn)的一些(xiē)小(xiǎo)問題，但(dàn)是，也(yě)恰恰是這(zhè)些(xiē)小(xiǎo)問題制約重組蛋白(bái)表達成功與否。所以，在進行重組蛋白(bái)表達時(shí)，我們需要有專業的技術支持，用(yòng)于解決各類可能(néng)會(huì)在遇到(dào)的問題。作(zuò)爲一家擁有十餘年蛋白(bái)抗體制備經驗的公司來(lái)說，普健生物專業爲廣大(dà)用(yòng)戶提供優質的蛋白(bái)抗體制備服務，如果您有相關需求，歡迎來(lái)電咨詢。
