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大(dà)腸杆菌是最早用(yòng)來(lái)表達重組蛋白(bái)的第一個宿主，因爲其成本低(dī)、效率高(gāo)、遺傳背景清晰等特點，使得其在實驗室中使用(yòng)非常的廣泛。但(dàn)是，對(duì)于很(hěn)多人來(lái)說，想要完美(měi)實現(xiàn)大(dà)腸杆菌原核蛋白(bái)表達相對(duì)來(lái)說也(yě)是非常困難的。有鑒于此，普健生物在這(zhè)裏和(hé)大(dà)家具體聊聊有關原核細胞表達的常見問題。
問題一：什(shén)麽情況下(xià)選擇大(dà)腸杆菌表達系統
大(dà)腸杆菌表達系統是最常見的表達系統之一，優點是遺傳背景清晰、成本低(dī)、表帶量高(gāo)等，缺點是容易形成包涵體以及無法進行表達後修飾。所以，這(zhè)個表達系統更适合用(yòng)來(lái)進行原核表達不需要後期修飾的蛋白(bái)，特别是小(xiǎo)分子蛋白(bái);
問題二：如何形成二硫鍵
未改造的大(dà)腸杆菌形成二硫鍵的能(néng)力相對(duì)要差一些(xiē)，需要有針對(duì)性地對(duì)二硫鍵形成進行改造，提升其表達能(néng)力;
問題三：大(dà)腸杆菌的表達載體有哪些(xiē)
用(yòng)于大(dà)腸杆菌表達的載體較多，常用(yòng)的有pET系列、pGEX系列、pCold系列等;
問題四：如何實現(xiàn)大(dà)腸杆菌的分泌表達
大(dà)腸杆菌擁有一套特殊的分泌機制，通過外(wài)分泌信号将蛋白(bái)富集到(dào)培養基中，但(dàn)是由于其細胞壁較厚，使得分泌所得的蛋白(bái)量較低(dī);
問題五：爲什(shén)麽會(huì)形成包涵體
原核表達常常會(huì)因爲蛋白(bái)的錯誤折疊或過快(kuài)表達而形成包涵體，主要原因是因爲：目标産物本身性質不合、宿主體系不合以及表達條件不合等原因;
問題六：原核表達如何實現(xiàn)蛋白(bái)純化
原核表達蛋白(bái)純化的方式主要有親和(hé)層析、離子交換、凝膠排阻層析等;
問題七：去除信号肽會(huì)不會(huì)影響蛋白(bái)表達
原核表達真核蛋白(bái)時(shí)信号肽是一定要去除的，這(zhè)個方法在大(dà)腸杆菌中可行;
問題八：如何提升蛋白(bái)的可溶性
原核大(dà)量表達時(shí)，很(hěn)容易形成包涵體，可以通過選擇促溶标簽、篩選合适宿主菌、改變培養誘導條件等方法提升其可溶性;
總的來(lái)說，大(dà)腸杆菌原核蛋白(bái)表達過程中需要注意的事(shì)項還是比較多的，但(dàn)是相比其他(tā)技術來(lái)說，其技術條件相對(duì)成熟，操作(zuò)也(yě)更加方便。當然了(le)，對(duì)于一些(xiē)特殊表達，大(dà)腸杆菌可能(néng)不合适，這(zhè)個時(shí)候就需要挑選一個更加合适的表達方法了(le)。普健生物專業爲廣大(dà)用(yòng)戶提供大(dà)腸杆菌原核表達服務，如果您有相關需求，歡迎來(lái)電咨詢。
