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質粒廣泛存在于生物界，是易總存在于染色體意外(wài)的DNA分子，具備自(zì)主複制能(néng)力。在日常蛋白(bái)制備過程中，我們常常通過基因技術對(duì)質粒基因信息進行修改，從(cóng)而制備我們所需的蛋白(bái)。但(dàn)是在制備過程中，會(huì)遇到(dào)很(hěn)多問題，導緻蛋白(bái)制備失敗。有鑒于此，普健生物和(hé)您具體聊聊有關質粒提取過程中的一些(xiē)常見問題。
1、時(shí)間控制方面的問題
對(duì)于裂解來(lái)說，時(shí)間不宜過長，一般來(lái)說，不要超過5分鐘(zhōng)。吸附時(shí)間不夠，或者溶解時(shí)間不夠，都會(huì)造成質粒DNA提取失敗;
2、大(dà)腸杆菌老(lǎo)化
大(dà)腸杆菌頻繁使用(yòng)會(huì)導緻其老(lǎo)化的現(xiàn)象，所以，在進行大(dà)腸杆菌培養時(shí)，需要重新挑選菌落進行培養;
3、質粒複制數量過低(dī)
所選質粒拷貝數過低(dī)，會(huì)在很(hěn)大(dà)程度上(shàng)早場質粒DNA提取量低(dī)的情況，在實驗時(shí)，需要盡可能(néng)挑選高(gāo)拷貝數的載體;
4、配置的溶液使用(yòng)不當
溶液溫度過低(dī)時(shí)，可能(néng)會(huì)出現(xiàn)渾濁的情況，之後保持在37度的環境下(xià)，才能(néng)保證溶液清亮(liàng);
5、吸附柱過載
對(duì)于不同的産品來(lái)說，吸附柱的吸附能(néng)力是各不相同的，如果提取的質粒數量較大(dà)，需要進行多次提取;
6、質粒未能(néng)全部溶解
洗脫質粒的時(shí)候，需要适當對(duì)其進行加溫或延長溶解時(shí)間;
7、洗脫液加入的位置不對(duì)
洗脫液需要在矽膠膜的中間位置加入，這(zhè)樣才能(néng)保證其達到(dào)最大(dà)洗脫率;
8、過多的乙醇殘留
在我們選擇漂洗液進行洗滌後，需要盡可能(néng)地去除殘留的液體，以避免殘留的乙醇對(duì)後期的實驗造成影響;
9、洗脫液的體積過小(xiǎo)
洗脫體積對(duì)回收率會(huì)造成一定的影響，過高(gāo)的洗脫體積會(huì)造成産品濃度過低(dī)的情況;
雖然說質粒提取能(néng)夠在很(hěn)大(dà)程度上(shàng)降低(dī)目的蛋白(bái)制備的操作(zuò)步驟，但(dàn)是，操作(zuò)過程中也(yě)有很(hěn)多需要注意的細節問題，需要在制備過程中多注意。當然了(le)，對(duì)于大(dà)部分的公司來(lái)說，這(zhè)個過程基本上(shàng)都不成問題。普健生物爲您提供專業的蛋白(bái)制備服務，如果您有相關需求，歡迎來(lái)電咨詢。
