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原核表達相信大(dà)家一定不會(huì)陌生，簡單來(lái)說，就是将需要表達的基因克隆到(dào)大(dà)腸杆菌中後，大(dà)量表達蛋白(bái)的一種方式，在蛋白(bái)純化、定位、功能(néng)分析等方面都有着廣泛的使用(yòng)。那麽，用(yòng)大(dà)腸杆菌來(lái)表達重組蛋白(bái)有哪些(xiē)好(hǎo)處?其步驟又是怎樣的呢(ne)?
大(dà)腸杆菌表達重組蛋白(bái)的好(hǎo)處：
1、控制簡單。之前我們就和(hé)大(dà)家聊過，大(dà)腸杆菌背景清晰，且易于成長和(hé)控制;
2、成本低(dī)。相對(duì)哺乳動物表達系統來(lái)說，大(dà)腸感覺表達蛋白(bái)的成本相對(duì)更低(dī);
3、質粒選擇多。擁有各種各樣的大(dà)腸杆菌菌株及其與之匹配的質粒，選擇更多;
原核表達重組蛋白(bái)的步驟如下(xià)：
1、獲得目的基因。通過基因重組技術獲得我們所需基因，并對(duì)其進行基因測序，以保障目的基因準确信;
2、準備表達載體。從(cóng)大(dà)腸杆菌中找出合适與表達這(zhè)段序列的質粒;
3、将目的基因插入載體中。将目的基因通過切段、植入等一系列的手段添加到(dào)質粒中;
4、宿主菌培養。對(duì)宿主菌進行培養，實現(xiàn)擴增;
5、誘導蛋白(bái)表達。通過外(wài)部環境刺激，誘導所需蛋白(bái)得以表達;
6、蛋白(bái)分析。對(duì)所得蛋白(bái)在特異性、活性等方面進行檢測，看(kàn)其是否爲所需蛋白(bái);
7、擴增及純化。對(duì)符合需求的宿主菌進行擴增，而後進行大(dà)批量蛋白(bái)生産及純化;
大(dà)腸杆菌表達重組蛋白(bái)的注意事(shì)項：
1、需要根據蛋白(bái)的最終應用(yòng)來(lái)考慮表達載體，可選擇融合表達;
2、融合表達時(shí)，外(wài)源DNA不能(néng)對(duì)轉錄、翻譯的過程造成幹擾;
大(dà)家應該不難看(kàn)出，原核表達重組蛋白(bái)的方式其實和(hé)普通原核蛋白(bái)表達的方式沒有太大(dà)的不同，隻是說在獲得目的基因的方式上(shàng)有所不同，而且需要選擇特定的質粒才能(néng)實現(xiàn)蛋白(bái)的表達。而就其他(tā)步驟而言，相差表達，但(dàn)是在一些(xiē)細節方面肯定會(huì)有所不同，這(zhè)就需要有相關的經驗來(lái)輔助了(le)。普健生物專業爲廣大(dà)用(yòng)戶提供重組蛋白(bái)表達服務，如果您有相關需求，歡迎來(lái)電咨詢。
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