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在蛋白(bái)純化的過程中，我們常常會(huì)遇到(dào)各種各樣的問題，有的是因爲操作(zuò)中出現(xiàn)問題導緻，有的是因爲生産環境變動導緻，還有一些(xiē)卻是正常的情況。當遇到(dào)這(zhè)些(xiē)問題的時(shí)候，我們可以根據日常總結的一些(xiē)經驗來(lái)進行相應的處理(lǐ)。今天，普健生物就和(hé)大(dà)家聊聊有關蛋白(bái)純化中出現(xiàn)沉澱的情況分析及其解決辦法。
一般在遇到(dào)這(zhè)種情況時(shí)，我們常常有兩種方法來(lái)予以處理(lǐ)。
方法一：複溶沉澱蛋白(bái)。通過成倍地加入稀釋液來(lái)稀釋重懸蛋白(bái)，并加入終濃度爲1.5M Nacl和(hé)100mlMDTT，搖晃5min後，所得結果就會(huì)好(hǎo)很(hěn)多;
這(zhè)個方法能(néng)夠解決一部分蛋白(bái)洗脫後沉澱的問題，但(dàn)是由于加入的Nacl和(hé)DTT，可能(néng)會(huì)對(duì)之後的實驗産生影響，所以需要采用(yòng)透析法去除後才能(néng)繼續後續實驗;
方法二：重新制備蛋白(bái)。何種方法爲方法一的升級版，再添加緩沖液的時(shí)候，使用(yòng)功能(néng)1M Nalc和(hé)10%的甘油，而後再通過離心的方式獲得上(shàng)清液，最後再用(yòng)10ml洗脫緩沖液重懸填料;
總的來(lái)說，蛋白(bái)洗脫後沉澱的現(xiàn)象非常的常見，最主要的原因是蛋白(bái)的濃度過高(gāo)，使得蛋白(bái)和(hé)蛋白(bái)之間相互作(zuò)用(yòng)的機會(huì)增多而形成蛋白(bái)聚合體。所以，一般這(zhè)個時(shí)候我們可以考慮通過稀釋來(lái)處理(lǐ)。通常，我們可以考慮加入高(gāo)濃度Nacl、高(gāo)濃度DTT或甘油的方式來(lái)處理(lǐ)。普健生物爲廣大(dà)用(yòng)戶提供專業的蛋白(bái)純化服務，如果您有相關需求，歡迎來(lái)電咨詢。
