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重組蛋白(bái)表達是現(xiàn)階段我們生産蛋白(bái)産品最常用(yòng)的方法之一，它在極大(dà)程度上(shàng)解決了(le)天然蛋白(bái)抗體解決不了(le)的問題。但(dàn)是，在日常我們表達蛋白(bái)的過程中，即便是按照實驗順序嚴格執行，依然會(huì)遇到(dào)很(hěn)多的問題，最終導緻蛋白(bái)表達失敗的情況。在這(zhè)裏，普健生物具體和(hé)大(dà)家聊聊蛋白(bái)表達的一些(xiē)常見問題，及其對(duì)應的解決辦法。
1、設計(jì)方面的問題
如果表達出來(lái)的蛋白(bái)出現(xiàn)密碼子移位、稀有子密碼問題、信号肽問題、蛋白(bái)大(dà)小(xiǎo)問題、标簽蛋白(bái)選擇問題以及GC含量太高(gāo)等問題時(shí)，就是因爲序列設計(jì)方面的問題。這(zhè)個時(shí)候我們就需要回憶反思一下(xià)，看(kàn)看(kàn)具體的問題出來(lái)哪裏，然後有針對(duì)性地進行解決;
2、操作(zuò)過程方面的問題
操作(zuò)過程方面的問題主要出現(xiàn)在質粒構建和(hé)表達工(gōng)程菌使用(yòng)等方面的失誤所造成。在質粒構建完成後，必須測序确認，保證無突變更不能(néng)出現(xiàn)堿基多餘或是缺失，并确認外(wài)源片段插入後讀框碼與載體步調完全一緻才行。
而針對(duì)工(gōng)程菌的使用(yòng)，必須确認标準有效，與載體質粒配套，否則，容易造成表達質粒丢失的情況;
3、蛋白(bái)容易降解的問題
很(hěn)多蛋白(bái)在完成表達等一系列的過程後，我們卻無法分離或提純出來(lái)，主要是因爲剛表達出來(lái)就被細菌内的蛋白(bái)酶降解掉了(le)，這(zhè)個時(shí)候我們就需要看(kàn)看(kàn)過程，尋找一下(xià)相應的解決辦法;
4、培養基的問題
一些(xiē)蛋白(bái)在LB培養基中表達不成功，但(dàn)是換成TB或2*YT培養基後就能(néng)表達成功。所以，當無法表達成功時(shí)，我們可以考慮更換培養基來(lái)繼續表達;
5、分子量異常的問題
有一些(xiē)蛋白(bái)的分子量和(hé)我們的預想有着一定的偏差，這(zhè)個時(shí)候我們可以分析一下(xià)蛋白(bái)，看(kàn)其本身氨基酸組合是否符合均态分布的規律。實驗過程中，我們需要仔細對(duì)比誘導/非誘導菌體蛋白(bái)帶譜差異，再結合數據進行判斷;
當然了(le)，蛋白(bái)表達中可能(néng)會(huì)遇到(dào)各種各樣的問題，并不是我們如上(shàng)所說的幾種，我們也(yě)可以結合實驗數據，對(duì)比相關文(wén)獻進行處理(lǐ)。當然了(le)，實在解決不了(le)的時(shí)候，可以考慮通過專業的蛋白(bái)表達公司來(lái)處理(lǐ)。普健生物專業爲您提供蛋白(bái)抗體表達服務，如果您有相關需求，歡迎來(lái)電咨詢。
