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在進行重組蛋白(bái)制備的過程中，我們常常會(huì)遇到(dào)各種各樣的問題，因爲原料不同、制備環境不同、技術操作(zuò)不同以及一些(xiē)不規範的小(xiǎo)錯誤，使得我們所要面對(duì)的問題各不相同。當然了(le)，随着技術的不斷完善，一些(xiē)問題得到(dào)了(le)良好(hǎo)的解決。但(dàn)是，因爲一些(xiē)操作(zuò)，使得很(hěn)多問題依然存在。今天，普健生物在這(zhè)裏和(hé)大(dà)家具體聊聊有關重組蛋白(bái)純化過程中出現(xiàn)的沉澱現(xiàn)象的原因及避免方法。
1、鎳離子含量過高(gāo)。在Ni純化過程中，一部分鎳離子會(huì)脫落，因爲其屬于重金(jīn)屬，會(huì)和(hé)蛋白(bái)凝集并産生沉澱;
2、我們搭建的環境不适合蛋白(bái)制備，需要重新考慮溶液濃度、PH值、溫度等方面的因素;
3、溶液PH值接近蛋白(bái)等電點(一般PH值接近等電點時(shí)，都容易造成蛋白(bái)沉澱);
4、使用(yòng)反複凍融的蛋白(bái)。我們知(zhī)道(dào)，每次凍融都會(huì)在一定概率上(shàng)造成蛋白(bái)活性的丢失，反複凍融則會(huì)造成這(zhè)個概率增加;
5、長時(shí)間4度保存。長時(shí)間将蛋白(bái)保持在4度環境下(xià)，容易滋生細菌，從(cóng)而造成蛋白(bái)降解和(hé)沉澱;
如何避免這(zhè)些(xiē)問題呢(ne)?
1、當我們用(yòng)鎳柱來(lái)純化蛋白(bái)時(shí)，适當加入一些(xiē)EDTA，從(cóng)而減少重金(jīn)屬反應;
2、重新分析蛋白(bái)的最佳制備環境，并保持好(hǎo)相應的制備環境;
3、加入一些(xiē)輔助性蛋白(bái)來(lái)保護我們所制備的蛋白(bái)産品;
4、盡量減少蛋白(bái)的反複凍融，盡量制備出來(lái)後就使用(yòng)掉;
5、短時(shí)間保存可考慮4度環境，長期保存還是盡量選擇-20度或-80度;
其實大(dà)家不難發現(xiàn)，在我們進行重組蛋白(bái)制備的時(shí)候，很(hěn)多造成沉澱的情況都是一些(xiē)小(xiǎo)問題所導緻，隻有将這(zhè)些(xiē)細節方面的工(gōng)作(zuò)做好(hǎo)了(le)，蛋白(bái)純化工(gōng)作(zuò)才能(néng)更好(hǎo)地進行。普健生物專業爲廣大(dà)用(yòng)戶提供優質的重組蛋白(bái)制備服務，如果您有相關需求，歡迎來(lái)電咨詢。
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