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無論采用(yòng)哪種表達系統表達蛋白(bái)時(shí)，都會(huì)遇到(dào)一些(xiē)問題，比如蛋白(bái)析出、蛋白(bái)表達量不高(gāo)、表達條件不是最佳等等，使得所得蛋白(bái)沒有達到(dào)預期。其實，這(zhè)個問題除了(le)我們在表達步驟設計(jì)上(shàng)的問題外(wài)，還有就是在一些(xiē)操作(zuò)細節上(shàng)不太規範。那麽，有沒有什(shén)麽辦法來(lái)提升蛋白(bái)表達及其可溶比例呢(ne)?今天，普健生物就和(hé)大(dà)家具體聊聊。
1、優化密碼子。根據表達系統對(duì)密碼子的偏好(hǎo)性進行優化篩選，提升表達效率。一般來(lái)說，我們優先選擇那些(xiē)使用(yòng)頻率大(dà)于20%的密碼子，避免因爲不充足的tRNA庫，導緻翻譯的延遲或錯配;
2、降低(dī)表達速率。可以通過降低(dī)IPTG的誘導濃度來(lái)降低(dī)蛋白(bái)的表達速率，通過速度的降低(dī)，使得其折疊率得到(dào)更好(hǎo)的平衡，最終提升蛋白(bái)的可溶性;
3、控制好(hǎo)溫度。當溫度保持在37度時(shí)，蛋白(bái)就容易形成一些(xiē)包涵體，而30度的表達條件則更容易産生可溶、有活性的蛋白(bái)。所以，我們在表達蛋白(bái)的是，盡量控制溫度保持在16、18或21度(當然了(le)，在表達過程中會(huì)産生一定的熱量，我們需要做好(hǎo)溫度監控，及時(shí)予以調節);
4、改善細胞周質載體。細胞周質環境在一定長度上(shàng)制約着蛋白(bái)的形成，優勢的話(huà)更加有利于蛋白(bái)的折疊及二硫鍵形成;
當然了(le)，還有很(hěn)多其他(tā)方面的原因會(huì)制約到(dào)蛋白(bái)的表達和(hé)可溶性，我們在文(wén)章：蛋白(bái)表達-哪些(xiē)因素會(huì)影響到(dào)蛋白(bái)表達?中和(hé)大(dà)家具體聊過，大(dà)家有興趣的話(huà)可以具體點擊閱讀一下(xià)。
其實在蛋白(bái)表達的過程中，因爲選擇表達系統的不同、操作(zuò)步驟不同、技術細節調整等一系列的差異下(xià)，都會(huì)造成所表達的蛋白(bái)和(hé)預期有着一定的偏差，其實這(zhè)是正常的。畢竟，制約着表達成功與否的關鍵因素實在是太多了(le)，隻有将每個細節做到(dào)完善，才能(néng)表達出我們所需的蛋白(bái)。普健生物作(zuò)爲一家擁有15年蛋白(bái)表達經驗的公司，專業爲廣大(dà)用(yòng)戶提供蛋白(bái)表達服務，如果您有相關需求，歡迎來(lái)電咨詢。
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