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在生物實驗中，我們在很(hěn)多時(shí)候都要用(yòng)到(dào)穩定細胞株構建技術，但(dàn)是如果采用(yòng)質粒建系的話(huà)，不僅時(shí)間長，而且成功率低(dī)，可能(néng)耗時(shí)半年都不一定能(néng)得到(dào)想要的結果。那麽，怎麽才能(néng)穩定構建細胞系，并獲得較好(hǎo)的結果呢(ne)?今天，普健生物就和(hé)大(dà)家具體聊聊。
穩定轉染，其實是相對(duì)瞬時(shí)轉染來(lái)說的，就是将進入細胞中的質粒整合到(dào)細胞基因組中去，讓其随着細胞的分類而不斷遺傳下(xià)去的方式。而瞬時(shí)轉染則會(huì)因爲整合基因的概率非常低(dī)而以遊離的形式存在。
什(shén)麽時(shí)候需要使用(yòng)到(dào)穩定細胞株構建呢(ne)?
1、需長期研究目的蛋白(bái)時(shí)。對(duì)于那些(xiē)需要長期研究的目的蛋白(bái)來(lái)說，不能(néng)存在太大(dà)的批次差，否則會(huì)造成實驗結果不準的情況，這(zhè)個時(shí)候就需要構建細胞株來(lái)保證蛋白(bái)批次相同;
2、目的蛋白(bái)半衰期長時(shí)。對(duì)于一些(xiē)半衰期較長的目的蛋白(bái)來(lái)說，瞬時(shí)RNA隻能(néng)達到(dào)幹擾表達的目的，卻無法去除蛋白(bái)，這(zhè)個還是可以用(yòng)穩定細胞株來(lái)實現(xiàn);
3、需極高(gāo)拷貝數表達時(shí)。目的蛋白(bái)需要極高(gāo)的拷貝數時(shí)，往往會(huì)因爲一些(xiē)認爲的因素而導緻結果不準确的情況，這(zhè)個時(shí)候，就需要構建穩定細胞株來(lái)幫助實驗研究;
4、需用(yòng)到(dào)誘導表達系時(shí)。主要針對(duì)一些(xiē)緻死基因或時(shí)空(kōng)表達的情況;
5、需要使用(yòng)到(dào)細胞時(shí)。比如裸鼠成瘤等atagenix;
構建穩定細胞株有哪些(xiē)要點?
我們知(zhī)道(dào)，穩定細胞株構建是一個長期的過程，無論是質粒構建，還是慢病毒包裝，以及細胞轉染和(hé)篩選，任何一個步驟都是至關重要的。甚至有的時(shí)候一個細胞株的構建就需要耗費半年的時(shí)間，隻要一個步驟出錯，就會(huì)造成實驗的失敗。所以，除了(le)注意各個步驟外(wài)，我們還需要做好(hǎo)如下(xià)三點：
1、優良的細胞種子。
2、選擇形狀穩定的細胞。
3、選擇活力無損的細胞。
總的來(lái)說，穩定細胞株不僅能(néng)降低(dī)成本，能(néng)夠減少污染，而且能(néng)夠有效地避免一些(xiē)認爲原因造成的影響，提升實驗結果精确度。雖然說現(xiàn)階段的穩定細胞株構建有着一定的局限性，但(dàn)是，相信技術的發展下(xià)，未來(lái)一定能(néng)夠解決這(zhè)些(xiē)問題。普健生物專業爲廣大(dà)用(yòng)戶提供穩定細胞株構建服務，如果您有相關需求，歡迎來(lái)電咨詢。
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