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爲了(le)能(néng)夠實現(xiàn)蛋白(bái)的大(dà)規模生産，我們通常會(huì)選擇通過構建穩定細胞株的方式來(lái)實現(xiàn)。當然了(le)，穩定細胞株構建的過程相對(duì)來(lái)說複雜(zá)，而且中間會(huì)因爲很(hěn)多原因造成構建失敗。有鑒于此，普健生物專業爲大(dà)家盤點一下(xià)有關穩定細胞株構建過程中的常見問題。
1、是否需要進行密碼子優化
因爲密碼子種類多樣、數量差異等問題，所以，密碼子優化對(duì)穩定細胞株的構建有着很(hěn)大(dà)的作(zuò)用(yòng)，能(néng)夠大(dà)幅度提高(gāo)目标蛋白(bái)的表達量;
2、如何選擇合适的啓動子
對(duì)于大(dà)部分的啓動子來(lái)說，使用(yòng)得當都能(néng)在大(dà)多數細胞中獲得高(gāo)表達性。CMV、EF1A、CAG、CBh、SFFV等都屬于強啓動子，可以作(zuò)爲穩定細胞株的啓動子;
3、穩定細胞系培養體系
構建穩定細胞系時(shí)一般建議(yì)使用(yòng)版抗性篩選濃度來(lái)維持細胞生長，可添加葡萄糖來(lái)調節細胞代謝(xiè)水(shuǐ)平，維持細胞增殖;
4、标簽是放(fàng)N端還是C端
這(zhè)個需要結合實際情況來(lái)選擇，如果信号肽在N端，則将标簽放(fàng)在C端;蛋白(bái)較小(xiǎo)也(yě)放(fàng)C端，純化中需要酶切标簽則推薦放(fàng)N端;
5、是否需要構建穩轉敲除的細胞系
一般來(lái)說，我們不建議(yì)敲除元件穩定持續的表達在細胞中，因爲這(zhè)個操作(zuò)會(huì)在很(hěn)大(dà)程度上(shàng)影響細胞的狀态;
穩定細胞株構建一般使用(yòng)在蛋白(bái)大(dà)規模生産時(shí)，在構建過程中需要注意的問題也(yě)不止如上(shàng)幾樣，各個方面的細節操作(zuò)也(yě)需要引起注意，而且需要有相應的技術支持。普健生物專業爲廣大(dà)用(yòng)戶提供穩定細胞株構建服務，如果您有相關需求，歡迎來(lái)電咨詢。
