穩定細胞株篩選的一般流程是怎樣的?

　　穩定細胞株篩選技術在生物技術工(gōng)程中是一項非常常用(yòng)的技術，通過這(zhè)個操作(zuò)，能(néng)夠篩選出可以穩定表達目的基因的細胞株。我們知(zhī)道(dào)，穩定細胞株構建的目的就是爲了(le)能(néng)夠得到(dào)可以持續表達的細胞，所以，篩選過程類似提純的過程。那麽，穩定細胞株篩選的一般流程是怎樣的呢(ne)?今天，普健生物就和(hé)大(dà)家具體聊聊。

　　1、載體構建。選擇合适的載體，然後将目的基因的DAN序列或蛋白(bái)編碼序列克隆到(dào)合适的表達載體中，并構建成重組質粒;

　　2、細胞轉染。将構建好(hǎo)的載體通過試單更多技術轉染到(dào)目标細胞中(通常采用(yòng)化學發、電穿孔法或病毒載體介導等方法)，通過細胞來(lái)進行目标蛋白(bái)的表達;

　　3、選擇标記引入。轉染後，将選中标記引入到(dào)細胞培養基中，從(cóng)中挑選包含标記的細胞繼續培養，無标記的則剔除掉(這(zhè)個方法對(duì)蛋白(bái)表達本身沒有太大(dà)意義，但(dàn)是能(néng)夠幫助我們挑選出包含目的基因的細胞);

　　4、單克隆挑選。将進過篩選後的細胞進行單克隆培養，篩選出能(néng)夠穩定表達且高(gāo)表達的細胞，并對(duì)其進行克隆;

　　5、穩定性驗證。對(duì)穩定細胞系進行驗證，确保目的基因的穩定高(gāo)效表達;

　　6、功能(néng)性驗證。對(duì)穩定細胞株進行功能(néng)型驗證，以确保所得蛋白(bái)能(néng)夠我們的需求;

　　總的來(lái)說，穩定細胞株篩選是一個非常複雜(zá)的過程，需要具備相當程度的耐性和(hé)細心，知(zhī)道(dào)獲得自(zì)己所需目的基因的細胞株爲止。普健生物作(zuò)爲一家具備多年蛋白(bái)抗體制備和(hé)定制經驗的公司，專業爲您提供穩定細胞株構建及篩選服務，如果您有相關需求，歡迎來(lái)電咨詢。