當我們一些(xiē)實驗需求時(shí),我們常常會(huì)用(yòng)到(dào)穩定細胞株構建技術,比如:需要頻繁轉染、提升基因幹擾效果、需要進行極高(gāo)拷貝數的表達等等。而穩定細胞株技術就是在活細胞的狀态下(xià),通過大(dà)量多代的培養所得的細胞。這(zhè)類細胞不僅具有正常的生理(lǐ)功能(néng),而且可以實現(xiàn)無限繁殖,能(néng)夠穩定地表達蛋白(bái)。
穩定細胞株的構建主要包括如下(xià)過程:
1、構建載體。
2、轉染、感染。
3、目的蛋白(bái)檢測。
4、抗生素篩選。
5、目的蛋白(bái)再次檢測。
6、細胞株穩定性檢測。
穩定細胞株的構建一般采用(yòng)兩種方法:體質轉染後的單克隆穩定株;二是應用(yòng)逆轉錄病毒,慢病毒轉染,從(cóng)而篩選穩定細胞株。
通常情況下(xià),我們會(huì)将質粒整合到(dào)染色體上(shàng),然後用(yòng)相應的質粒中的DNA去篩選細胞核,形成穩定表達的細胞株。
細胞株是用(yòng)單細胞分離培養或通過篩選的方法,由單細胞增殖形成的細胞群。細胞株的特殊性質或标志必須在整個培養期間始終存在。原代培養物經首次傳代成功後即爲細胞系(cell line), 由原先存在于原代培養物中的細胞世系所組成。如果不能(néng)繼續傳代,或傳代次數有限, 可稱爲有限細胞系(finite cell line), 如可以連續培養, 則稱爲連續細胞系(continuous cell line), 培養50代以上(shàng)并無限培養下(xià)去。
采用(yòng)穩定細胞株構建技術能(néng)夠在極大(dà)程度上(shàng)保持細胞的穩定性,從(cóng)而穩定地提供蛋白(bái)産品,讓其不會(huì)因爲不同細胞而産生蛋白(bái)差異的現(xiàn)象。而且大(dà)量表達的穩定細胞株可以在更大(dà)程度上(shàng)解決大(dà)批量基因片段引入的問題,實現(xiàn)更好(hǎo)地表達。普健生物是一家擁有15年蛋白(bái)抗體生産經驗的企業,專業爲廣大(dà)用(yòng)戶提供蛋白(bái)抗體制備服務,優質的穩定細胞株構建技術,爲您解決各類蛋白(bái)抗體需求。