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就目前來(lái)說，穩定細胞株和(hé)過表達細胞株是基因研究中最常用(yòng)的方法，同時(shí)通過RNA感染技術，即可實現(xiàn)我們常說的穩定細胞株構建。這(zhè)個方法相對(duì)來(lái)說相對(duì)困難，需要有一定技術實力的公司才能(néng)實現(xiàn)。有鑒于此，普健生物就在這(zhè)裏和(hé)大(dà)家具體聊聊有關穩定細胞株構建的流程及其重點難點分析。
穩定細胞株的構建流程：
1、構建載體。通過過表達或幹擾載體的操作(zuò)獲得合适的載體細胞;
2、病毒包裝。通過慢病毒包裝以及相關操作(zuò)，獲得适合用(yòng)于感染的病毒;
3、細胞轉染。将病毒轉染到(dào)目的細胞中，并篩選出轉染成功的細胞進行細胞株培養;
4、藥物篩選。通過提純和(hé)篩選，獲得高(gāo)純度的目的蛋白(bái)溶液;
5、蛋白(bái)功能(néng)分析。采用(yòng)各種試劑進行蛋白(bái)的相關功能(néng)分析，看(kàn)其是否能(néng)夠能(néng)夠滿足我們的需求;
這(zhè)個時(shí)候大(dà)家可能(néng)就覺得非常的奇怪了(le)，明(míng)明(míng)這(zhè)麽簡單的幾個步驟，怎麽就困難了(le)呢(ne)?下(xià)面，我們和(hé)大(dà)家具體分析一下(xià)穩定細胞株構建的難點所在。
1、所用(yòng)細胞不合适。一般來(lái)說，很(hěn)多懸浮細胞對(duì)病毒的轉染效果并不好(hǎo)，而且操作(zuò)過程非常的困難。還有就是對(duì)于那些(xiē)極度敏感的細胞來(lái)說，病毒的入侵可能(néng)直接造成細胞的死亡;
2、病毒超過了(le)過表達細胞穩定性的極限。基因會(huì)通過病毒随機插入到(dào)目的細胞的基因組中，而插入的基因可能(néng)會(huì)對(duì)已經過表達細胞的穩定性造成影響，直接造成其無法表達的情況。或者在後續細胞傳代中，會(huì)出現(xiàn)基因表達逐漸下(xià)降的情況;
3、安全性不佳以及成本高(gāo)。一般來(lái)說病毒操作(zuò)的成本都很(hěn)高(gāo)，即便幾千塊的病毒包裝都需要2-3周的時(shí)間去實現(xiàn)。而且病毒對(duì)人體都存在着一定的感染性，需要的實驗室安全等級也(yě)較高(gāo);
4、病毒優化和(hé)存儲性問題。不同批次的病毒都會(huì)存在着一定的差異，所以，每次實驗都需要對(duì)病毒進行相關的檢測，以保證使用(yòng)最優病毒進行實驗。同時(shí)，病毒都需要在-80度的環境下(xià)保存，時(shí)間超過2周都會(huì)出現(xiàn)活性下(xià)降的情況;
總的來(lái)說，進行穩定細胞株構建需要有更高(gāo)的實驗成本和(hé)安全成本，隻有在滿足了(le)這(zhè)兩項需求的前提下(xià)，我們才可以進行後續的操作(zuò)。而在進行實驗的時(shí)候，我們需要針對(duì)其重點難點做好(hǎo)相應的備份和(hé)準備工(gōng)作(zuò)，這(zhè)樣就需要有更高(gāo)的技術去做支撐。隻有做好(hǎo)了(le)這(zhè)些(xiē)方面的工(gōng)作(zuò)，才能(néng)保證穩定細胞株得以構建。普健生物專業爲廣大(dà)用(yòng)戶提供穩定細胞株構建服務，如果您有相關需求，歡迎來(lái)電咨詢。
